Hồng y Mamberti sinh ngày 7 tháng 3 năm 1952 tại Marrakesh, Maroc. Cha mẹ ông trở về Pháp ít ngày sau khi hạ sinh ông. Chàng trai trẻ Mamberti học luật công và khoa học chính trị.[2] Sau quá trình tu học, ngày 20 tháng 9 năm 1981, ông được thụ phong chức vị linh mục bởi vị chủ sự là Jean-Charles Thomas, Giám mục chính tòa Giáo phận Ajaccio. Tân linh mục cũng là thành viên linh mục đoàn Giáo phận này.[3] Ông đã có bằng cấp về luật giáo luật và bắt đầu theo học tại Học viện Giáo hoàng về Giáo hội. Ông gia nhập ngành ngoại giao của Tòa thánh vào ngày 1 tháng 3 năm 1986.[2]

Trong thời gian là linh mục, Mamberti phục vụ trong công tác đại diện của giáo hoàng ở Algeria (1986-1990), Chilê (1990-1993), tại Liên Hợp Quốc (1993-1996), ở Lebanon (1996-1999), và tại Phòng Quan hệ với Hoa Kỳ của Ban Thư ký Nhà nước (1999-2002).[2]